口腔医学研究

作者：冯豪, 袁国华

单位：口颌系统重建与再生全国重点实验室,口腔生物医学教育部重点实验室,口腔医学湖北省重点实验室,武汉大学口腔医学院 湖北 武汉 430079

关键词：March6,成牙本质细胞分化,牙本质生成,基因敲除,

基金：国家自然科学基金(编号:82370914)

目的: 明确膜相关的RING-CH型E3泛素连接酶6(membrane-associated RING finger protein 6, March6)在成牙本质细胞分化以及牙本质生成中的作用。方法: 采用免疫组织化学染色(immunohistochemistry, IHC)分析不同发育阶段小鼠牙齿切片,分析March6的时空表达特征。体外敲低小鼠牙乳头细胞(mouse dental papilla cells, mDPCs)中的March6,并进行矿化诱导,分别使用实时定量PCR、Western bolt、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色以及茜素红染色,评估March6对mDPCs成牙本质细胞向分化潜能的影响。将Prx1cre与March6flox/flox小鼠配繁,获得牙齿间充质中特异性敲除March6的小鼠(March6 cKO, Prx1cre;March6flox/flox)。通过IHC验证March6被特异性敲除。随后,对出生后10 d的March6 cKO及其同窝对照小鼠的下颌行切片苏木素-伊红染色、显微CT(micro-computed tomography, Micro-CT)观察,以确定March6在体内对牙本质生成的影响。结果: March6在胚胎时期小鼠牙齿间充质中表达水平较低,而在成牙本质细胞形成后,March6在成牙本质细胞中高表达。体外敲低mDPCs中的March6,并诱导其向成牙本质细胞分化,牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,Dmp1)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,Dspp)的mRNA以及蛋白水平相较于对照显著上调。同时,细胞ALP活性和钙化结节生成能力在敲低组中也明显增强。组织学形态观察以及Micro-CT分析结果显示,March6 cKO小鼠的牙本质层相较于同窝对照明显增厚。结论: E3泛素连接酶March6对成牙本质细胞分化以及牙本质生成发挥抑制作用。

来源：2025年第8期

《口腔医学研究》期刊编辑部

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