口腔医学研究

作者：张黄, 苗瑞婧, 范旭升, 黄婕, 王永武

单位：西湖大学医学院附属杭州市第一人民医院口腔科 浙江 杭州 310006

关键词：牙龈成纤维细胞,NLRP3炎症小体,牙龈卟啉单胞菌,种植体周围炎,

基金：杭州市农业与社会发展科研项目(编号:2022509508)

目的: 本研究在于探究核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3, NLRP3)炎症小体在人原代牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts, hGFs)炎症刺激中的潜在作用机制。方法: 使用沉默RNA(silencing RNA, siRNA)构建NLRP3沉默或阴性对照并转染至hGFs,与牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis, Pg)共培养诱导炎症,并给予1 μmol/L NLRP3炎症小体激动剂BMS-986299干预。使用流式细胞术检测各组细胞凋亡;使用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量;使用Western blot检测了NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1前体(cysteinyl aspartate specific proteinase-1 precursors,pro-Caspase-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)与凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis associated speck-like protein containing a caspase activating recruitment domain, ASC)等NLRP3炎症小体相关蛋白,与白细胞介素-1β前体(interleukin-1β precursors, pro-IL-1β)、磷酸化的核因子κB(nuclear factor kappa-B phosphorylation,p-NF-κB)/核因子κB(nuclear factor kappa-B, NF-κB)与消皮素D(gasdermin D, GSDMD)等细胞焦亡相关蛋白;免疫荧光检测NLRP3炎症小体的细胞定位。结果: 流式细胞术结果显示,NLRP3沉默能有效减少细胞凋亡;ELISA检测结果表明NLRP3沉默能降低Pg诱导的炎症因子水平;Western blot和免疫荧光结果表明NLRP3沉默可以抑制NLRP3炎症小体激活,并抑制pro-IL-1β的表达、NF-κB的磷酸化与GSDMD介导的细胞焦亡。而NLRP3沉默的效果均在NLRP3炎症小体激动剂BMS-98629使用后部分逆转。结论: NLRP3可以激活NLRP3炎症小体和炎症相关通路,同时促进hGFs细胞焦亡。

来源：2025年第2期

《口腔医学研究》期刊编辑部

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