口腔医学研究

作者：杜杨格, 程雅雯, 郭倩, 张萍, 周永胜

单位：北京大学口腔医学院·口腔医院修复科 国家口腔医学中心 国家口腔疾病临床医学研究中心 口腔生物材料和数字诊疗装备国家工程研究中心 口腔数字医学北京市重点实验室 北京 100081

关键词：人脂肪间充质干细胞,细胞分裂周期蛋白20,成骨向分化,p65,

基金：国家自然科学基金(编号:81970911)；北京市自然科学基金(编号:7182183、7202233)

目的:探究细胞分裂周期蛋白20 (cell division cycle 20, CDC20)对人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived stem cells, hASCs)成骨分化的调控作用及其机制。方法:将hASCs分别进行成骨向诱导0、7、14 d后,通过实时荧光定量PCR和Western blot检测CDC20表达量的变化。对稳定敲低CDC20的hASCs进行成骨向诱导后,分别通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色定量实验,Western blot检测成骨相关标志物的表达。 将稳定敲低CDC20的hASCs与β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)材料混合植入裸鼠皮下,8周后取材,HE、MASSON染色检测骨胶原的形成。对过表达CDC20的hASCs进行成骨向诱导后,通过ALP染色定量实验检测hASCs成骨向分化。利用免疫共沉淀和Western blot探索CDC20和p65的关系。构建CDC20和p65双敲细胞系,检测p65在CDC20调控骨再生中的作用。结果:在hASCs成骨向分化过程中,CDC20的表达显著升高(P＜0.05)。稳定敲低CDC20的hASCs在成骨诱导后ALP活性为(7.31±0.25)、(11.01±0.49) U/gprot,低于对照组(16.00±0.35) U/gprot,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot结果显示敲低CDC20组RUNX2的蛋白水平降低。稳定敲低CDC20的hASCs与β-TCP材料混合物植入裸鼠皮下8周后其形成的骨胶原较对照组减少。过表达CDC20的hASCs在成骨诱导后ALP活性为(20.74±0.53) U/gprot,高于对照组(12.58±0.42) U/gprot,差异有统计学意义(P＜0.05)。CDC20可结合p65;敲低CDC20后,p65的表达量升高;过表达CDC20后,p65的表达量降低,且在加入蛋白酶体抑制剂MG132后回升。CDC20和p65双敲细胞系成骨诱导后,ALP染色及定量结果表明CDC20对hASCs成骨向分化的调控依赖于p65。结论:CDC20通过泛素蛋白酶体途径降解p65促进人脂肪间充质干细胞成骨向分化,为骨再生提供全新的潜在治疗靶点。

来源：2022年第6期

《口腔医学研究》期刊编辑部

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